Áramlási citometrián alapuló gyors módszer baktériumok antibiotikum rezisztencia profiljának meghatározására
Kállai András
Molekuláris Orvostudományok
Dr. Enyedi Péter
SE Belgyógyászati és Onkológiai Klinika, Simonyi terem
2024-05-22 14:00:00
Celluláris és molekuláris élettan
Dr. Hunyady László
Dr. Lőrinc Márton Ákos
Dr. Ludwig Endre
Dr. Tóth József
Dr. Székely Andrea
Dr. Erdélyi László Sándor
Dr. Peskó Gergely
Bevezetés: A korai, adekvát antibiotikum terápia kritikus jelentőséggel bír az infektív állapot kapcsán intenzív ellátásra szoruló betegek esetén. Az antibiotikum érzékenységi profil megállapításához szükséges idő lerövidítése javíthat a klinikai döntéshozatal és a kimenetel szempontjából. Munkacsoportunk ennek megfelelően egy megbízható, pár órán belül eredményül MIC értéket adó, áramlási citométer alapú eljárás kifejlesztését tűzte ki célul, melynek pontosítását és validálását is elvégeztük.
Módszerek: Az általunk fejlesztett, MICy-nek nevezett eljárást hat különböző laboratóriumi baktériummal (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae,
Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Enterococcus faecalis) teszteltük. Elsőként a növekedésük ütemét vizsgáltuk. Az új módszert a gold standard mikrodilúcióval hasonlítottuk össze. A baktériumokat 4 órán keresztül 12 féle antibiotikum 7 felező hígításos koncentrációjával inkubáltuk, Mueller-Hinton és Luria-Bertoni tápoldatban, minden mérést háromszor ismételve. Az inkubálás után a mintákat pH 3-as, acridine orange festéket tartalmazó HBSS oldattal fixáltuk és festettük. A felnövekedés vagy gátlás diszkriminatív döntése érdekében szabályt alkottunk, miszerint a felnövekedés küszöbértéke a kezdeti baktériumszám, amennyiben a következő felezőhígítás mellett legalább a kezdeti baktériumszám kétszeresét detektáljuk. A megállapított MIC értékekből az EUCAST adatbázisa alapján érzékenységi profilt állítottunk össze. Az eredmények értékelésénél az ISO/DIS 20776-2:2007 szabványt vettük alapul, a módszereket Fleiss’ kappa számítással hasonlítottuk össze.
Eredmények: A MICy és a mikrodilúció az egyes adatpontok tekintetében 87%-os egyezést mutatott, a MIC értékek tekintetében 89%-os alapvető egyezést találtunk. Az érzékenységi profilok tekintetében 92% egyezés mellett 8,7% súlyos eltérést és 3,2% nagyon súlyos eltérést találtunk az adatokat a fenti ISO szabvány szerint elemezve. A Fleiss’ kappa analízisek az adatpontok és MIC tekintetében erős, az érzékenységi profilok tekintetében majdnem tökéletes összefüggést igazoltak a vizsgált és a kontroll eljárás között.
Következtetések: A MICy, mint egy új, áramlási citométer alapú antibiotikum érzékenységi vizsgáló eljárás a klasszikus mikrobiológiai módszerrel összevetve hasonló megbízhatóság mellett egy munkanappal korábban szolgáltat eredményül antibiotikum rezisztencia profilt.
