Az LTB4 szöveti eloszlásának vizsgálata új genetikailag kódolt bioszenzorokkal
Tamás Szimonetta Xénia
Molecular Medicine
Dr. Várnai Péter
SE, Elméleti Orvostudományi Központ, Élettani Intézet könyvtára
2026-09-02 14:00:00
Cellular and Molecular Physiology
Dr. Hunyady László
Dr. Enyedi Balázs Gábor
Dr. Kereszturi Éva
Dr. Lipinszki Zoltán
Dr. Csanády László
Dr. Szöllősi András
Dr. Méhes Előd
A leukotrién B4 (LTB4) egy leukociták által termelt lipid mediátor, mely kemoattraktáns hatása révén fontos szerepet tölt be a gyulladásos folyamatokban. Bár az LTB4 jelátviteli útvonalait és hatásmechanizmusait részletesen feltárták, a steril szöveti sebzést követő szerepe, valamint az aktivált immunsejtekből felszabaduló LTB4 szöveti eloszlása kevéssé ismert: nem ismert, hogy fehérvérsejtekből felszabadulva milyen messze diffundál és milyen távoli sejtekre hat. Kutatómunkánk céljául egy olyan bioszenzor fejlesztését tűztük ki, ami lehetőséget ad az endogén módon felszabaduló LTB4 szöveti eloszlásának vizsgálatára.
Az általunk fejlesztett bioszenzor vázát az LTB4 nagy affinitású receptora a BLT1 receptor képezi. A receptor harmadik intracelluláris hurokrégiójához különböző linker régiók használatával egy cirkulárisan permutált zöld fluoreszcens fehérjét fuzionáltunk. A linker régiók módosításával számos szenzorvariánst hoztunk létre, amelyek közül a sejten belüli elhelyezkedésük és az LTB4-re adott fluoreszcencia intenzitásváltozásuk alapján kiválasztottuk a legjobb tulajdonságokkal rendelkezőt, amit GEM-LTB4 -nek neveztünk el. Az LTB4 jelenlétére GEM-LTB4 koncentrációfüggő módon reagál (EC50=19,8 nM). A szenzor ligandkötési tulajdonságai megegyeznek a BLT1 receptoréval, azonban az endogén recepor jelpályáit nem aktiválja. A szenzor karakterizálást követően, a GEM-LTB4 -gyel egér neutrofil granulociták LTB4 termelését vizsgáltuk. A szenzor használatával vizualizáltuk az fMLP stimulus hatására felszabaduló LTB4 -et, valamint az egyedi neutrofilekből származó LTB4-grádiensek megjelenését.
A QF2-QUAS rendszer alkalmazásával a GEM-LTB4 bioszenzort sejtspecifikusan fejeztük ki zebrahal lárvákban. A transzgenikus zebradánió vonalakban farokúszó sebzést követően nyomon követtük az exogén LTB4 szövetekbe való bejutását és diffúzióját. Ezenfelül sikeresen detektáltuk a kalciumionofór hatására zebrahal neutrofilekből felszabaduló endogén LTB4 jelenlétét.
Összességében, munkánk során létrehoztunk egy LTB4 -re specifikus, nagy szenzitivitással rendelkező, konfokális mikroszkóppal jól detektálható szenzort, mellyel nemcsak ex vivo, de in vivo állatmodellen is képesek voltunk az exogén és endogén LTB4 jelenlétének kimutatására.
